流式细胞术是什么?在试管周期当中发挥着什么样的作用?
流式细胞术是一种基于荧光技术的检测方法,能够从悬浮在溶液中的单个细胞同时测定多种特性,诸如细胞群体数量及蛋白质表达水平。作为一种高效工具,它能够对细胞特性进行快速、定量且精确的测量,并出色地解析细胞群体的异质性。这一技术依赖于将单个细胞引导通过光源,并测量在不同波长下产生的光散射和荧光发射。
在辅助生殖研究当中,流式细胞术发挥的作用主要有两方面,一是检测免疫标志物,二是检测精精液的相关指标。
一、检测免疫细胞表面标志物
1.T细胞亚群的检测
调节性T细胞(Treg细胞):这类细胞在免疫系统中扮演着“和平使者”的角色,它们能阻止免疫反应过度,保护身体不受自身抗体的伤害。在不孕不育和不明原因的流产中,Treg细胞的数量或功能可能出现问题。如果妊娠期Treg细胞不足,母体可能会排斥胎儿,导致流产。一些研究发现,反复流产的女性体内Treg细胞数量减少,功能也降低了。
双阴性T淋巴细胞(DNT细胞):这些细胞也能调节免疫反应,保护胚胎不受伤害。适量的DNT细胞对怀孕有益,但反复流产可能导致DNT细胞异常增多,反而影响免疫调节。
2.自然杀伤(NK)细胞的检测
NK细胞在女性生育中扮演重要角色。如果外周血中NK细胞数量过多,可能会导致流产。这些细胞的活性还与胚胎移植的成功率有关。一些研究尝试通过调整NK细胞的活性来提高胚胎植入成功率。
二、精准完成精液分析
1.白细胞含量的检测
精液中常有白细胞,它们可能会通过一些方式损害精子。流式细胞术技术能准确检测白细胞数量,区分白细胞和生精细胞,还能进一步区分白细胞的不同类型。
2.精子DNA完整性的检测
精子的DNA如果受损,可能会影响受孕和胚胎质量。流式细胞术技术能检测精子DNA的损伤程度。
3.线粒体功能的检测
线粒体是精子的“能量工厂”,它们的功能状态与精子活力密切相关。流式细胞术技术能检测精子线粒体的功能状态,有助于诊断弱精子症。
4.精子获能与顶体反应的检测
精子需要经历一系列变化才能成功受精,包括获能和顶体反应。流式细胞术技术能检测这些过程是否正常进行,从而评估精子的受精能力。
5.精子活性氧的检测
活性氧是精子和生殖道中产生的一种物质,适量时有助于精子活动,但过多时会损害精子。流式细胞术技术能检测精子产生的活性氧水平,帮助了解精子是否受到损害。
1.单精子显微注射技术,实现精准受精
通过以1000至2000转/分钟的转速对稀释后的精液进行约10分钟的离心处理,能够高效地将含有病毒的上清液与精子分离开来。利用超高倍显微镜对精子进行精细观察。这种方法使试管助孕师能够依据精子的形态、活动力等精确数据,筛选出健康且高质量的精子。
随后,采用单精子注射(ICSI)技术,将单个精子直接注入卵子内,实现精准受精,其成功率高达99%以上。受精卵将在特制的培养液中培育至第五天,形成生命力旺盛、活性强的优质囊胚。
2.第三代试管婴儿技术确保囊胚健康
在获得囊胚后,试管助孕师利用第三代试管婴儿技术(PGT),对囊胚的23对染色体进行结构和数目的全面筛查。这一技术能够准确检测囊胚染色体是否存在缺失、倒置、易位、重复等异常情况,或诊断基因突变点,从而有效避免近300多种遗传疾病对胎儿的潜在影响,确保囊胚的健康。
在移植前,试管助孕师还会根据女性的身体状况和子宫内环境进行个性化调理,如使用激素药物调整内膜厚度,直至达到理想状态(子宫内膜厚度8-12mm,血流丰富,细胞分裂良好,无子宫疾病等)。随后,将健康的囊胚植入子宫内合适的位置,以提高着床成功率。
3.移植后科学保胎,保障胎儿健康成长
试管助孕师会根据女性的身体状况,注射适量天然黄体酮或HCG,以促进黄体细胞增生,增加孕激素的合成与分泌,提高子宫容受性,从而支持黄体功能,提高囊胚的着床率。同时,这些措施还能有效抑制免疫反应,防止囊胚被母体排斥而导致着床失败或发生胎停、流产。